siRNA和DNA不同,進行細胞轉(zhuǎn)染時用的轉(zhuǎn)染試劑也應(yīng)該不同

1.首先siRNA由于只有二十幾個堿基對,相比DNA幾千上萬對堿基,小了許多。目前大多數(shù)轉(zhuǎn)染試劑都針對比較大的質(zhì)粒DNA,而非小的RNA分子。用于轉(zhuǎn)染DNA的轉(zhuǎn)染試劑和方法并不一定適用于轉(zhuǎn)染siRNA。
2.其次,siRNA轉(zhuǎn)染比DNA轉(zhuǎn)染對轉(zhuǎn)染試劑細胞毒性的要求嚴(yán)格。由于轉(zhuǎn)染試劑對細胞的毒性往往是對眾多基因直接地或間接地上調(diào)或下調(diào)的結(jié)果,這對于過量表達的DNA轉(zhuǎn)染來說,一些實驗的影響不大,但對于以研究基因干擾為主要目的的RNAi實驗來說,就是致命的,因為細胞死亡和RNAi實驗造成的結(jié)果在現(xiàn)象上是一致的,輕則影響實驗數(shù)據(jù),重則改變實驗結(jié)果。siRNA實驗首先要求選擇適合轉(zhuǎn)染小的RNA的有效轉(zhuǎn)染試劑,其次要求轉(zhuǎn)染試劑本身的細胞毒性很小。
建議選擇專門針對siRNA的有效、低毒轉(zhuǎn)染試劑