正確的實(shí)驗(yàn)技巧是成功的熒光定量PCR反應(yīng)重要然而常被忽視的要素。為得到最佳的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，實(shí)驗(yàn)人員要盡可能減少樣品間交叉污染的可能，避免將核酸從一個(gè)實(shí)驗(yàn)帶入下一個(gè)實(shí)驗(yàn)。

以下措施有助于避免實(shí)驗(yàn)污染問(wèn)題：

1.用稀釋的漂白劑或凈化劑抹擦工作臺(tái)

2.在指定地配有紫外燈的超凈室、罩式或臺(tái)式超凈臺(tái)中準(zhǔn)備樣品，理想的條件是樣品準(zhǔn)備與PCR擴(kuò)增分開(kāi)在不同的區(qū)域，注意避免質(zhì)粒或擴(kuò)增子污染樣品準(zhǔn)備區(qū)，絕不要將擴(kuò)增后產(chǎn)物帶入指定潔凈區(qū)

3.在樣品準(zhǔn)備和配制反應(yīng)液過(guò)程中勤換手套

4.使用軸防護(hù)裝置的移液器和帶濾芯的移液器頭

5.勤用稀釋的漂白劑清潔移液器

6.只使用PCR級(jí)的水和PCR專(zhuān)用試劑進(jìn)行PCR實(shí)驗(yàn)

7.用帶旋蓋的EP管稀釋和配制反應(yīng)液

注意：

在進(jìn)行PCR實(shí)驗(yàn)時(shí)，還應(yīng)準(zhǔn)備一個(gè)無(wú)模板的對(duì)照來(lái)驗(yàn)證有無(wú)污染發(fā)生，而且用熱啟動(dòng)酶防止反應(yīng)開(kāi)始之前的非特異性擴(kuò)增。

為最小化實(shí)驗(yàn)結(jié)果的統(tǒng)計(jì)學(xué)偏差，先制備混合反應(yīng)液，建議所有樣本有三個(gè)重復(fù)。

大劑量包裝的反應(yīng)試劑，使用前進(jìn)行分裝，盡量減少試劑的反復(fù)凍融。